毛細管電泳是以彈性石英毛細管為分離通道,以高壓直流電場為驅動力,依據(jù)樣品中各組分之間淌度和分配行為上的差異而實現(xiàn)分離的電泳分離分析方法。
毛細管電泳的使用方法介紹:
?。?)按照儀器操作手冊開機,預熱、輸入各項參數(shù),如毛細管溫度、操作電壓、檢測波長和沖洗程序等。操作緩沖液需過濾和脫氣。沖洗液、緩沖液等放置于樣品瓶中,依次放入進樣器。
?。?)毛細管處理的好壞,對測定結果影響很大。未涂層新毛細管要用較濃堿液在較高溫度(例如用1mol/L氫氧化鈉溶液在60℃)沖洗,使毛細管內(nèi)壁生成硅羥基,再依次用0.1mol/L氫氧化鈉溶液、水和操作緩沖液各沖洗數(shù)分鐘。兩次進樣中間可僅用緩沖液沖洗,但若發(fā)現(xiàn)分離性能改變,則開始須用0.1mol/L氫氧化鈉溶液沖洗,甚至要用濃氫氧化鈉溶液升溫沖洗。凝膠毛細管、涂層毛細管、填充毛細管的沖洗則應按照所附說明書操作。沖洗時將盛溶液的試樣瓶依次置于進樣器,設定順序和時間進行。
?。?)操作緩沖液的種類、pH值和濃度,以及添加劑[用以增加溶質的溶解度和(或)控制溶質的解離度,手性拆分等]的選定對測定結果的影響也很大,應照各品種項下的規(guī)定配制,根據(jù)初試的結果調(diào)整、優(yōu)化。
(4)將待測供試品溶液瓶置于進樣器中,設定操作參數(shù),如進樣壓力(電動進樣電壓)、進樣時間、正極或負極進樣、操作電壓或電流、檢測器參數(shù)等,開始測試。根據(jù)初試的電泳譜圖調(diào)整儀器參數(shù)和操作緩沖液,以獲得優(yōu)化結果。而后用優(yōu)化條件正式測試。
?。?)測試完畢后用水沖洗毛細管,注意將毛細管兩端浸入水中保存,如果長久不用應將毛細管用氮吹干,最后關機。
?。?)定量測定以采用內(nèi)標法為宜。用加壓或減壓法進樣時,供試品溶液黏度會影響進樣體積,應注意保持試樣溶液和對照溶液黏度一致;用電動法進樣時,被測組分因電歧視現(xiàn)象和溶液離子強度會影響待測組分的遷移量,也要注意其影響。